Saimnieks LV / 2021.gads (Augusts.)

Sekojot progresīvo valstu paraugam, pēdējos gados arī Latvijā tiek attīstīta asistētās reprodukcijas tehnoloģiju (ART) nozare veterinārmedicīnā. Lai sekmētu Latvijas ciltsdarba programmu izpildi izzūdošo vietējo govju šķirņu saglabāšanai, laika periodā no 2017. līdz 2020. gadam tika apgūta multiplās ovulācijas un embriju transferences (MOET) metode ERAF projekta Nr. 1.1.1.1/16/A/025 BioReproLV ietvaros. Lai sekmētu iesākto darbu un Latvijas apstākļiem piemērotu citu govju šķirņu pavairošanu, kopš 2020. gada tiek apgūta oocītu aspirācijas un fertilizācijas in vitro (OPU/IVF) metodes pielietošana LAD37 projekta Nr.19-00-A01620-000094 ietvaros.

Abu metožu gadījumā process rezultējas ar ģenētiski vērtīgas donorgovs un atbilstoša vaislinieka embrija transferenci jeb pārnešanu surogātmātē jeb recipientā grūsnības norisei. Par recipientu vislabāk ir izmantot optimāli izaugušu, veselu teli. Teles jeb recipienta ciltsvērtība nav būtisks faktors. Par recipientu var izmantot bezšķirnes teli. Tā ir viena no ART metožu priekšrocībām, kad ģenētiski mazvērtīgs dzīvnieks iznēsā un laiž pasaulē ģenētiski vērtīgu vecāku pēcnācēju. Piemēram, gaļas govju ganāmpulkā, kurā pārsvarā ir krustojuma dzīvnieki, tiem var transferēt ģenētiski vērtīgo dzīvnieku embrijus. Rezultātā ganāmpulks tiek atražots nevis uz krustojuma dzīvnieku pēcnācēju rēķina, bet krustojuma dzīvnieki iznēsā mums vajadzīgās izcelsmes teļus. Tā tiek ievērojami samazināts laiks krustojuma dzīvnieku paaudžu nomaiņai līdz ģenētiskajam šķirnes dzīvnieku statusam.

MOET gadījumā donorgovij tiek inducēta multiplā ovulācija, tā tiek mākslīgi apsēklota un dzimumcikla 7. dienā no tās tiek iegūti embriji pārnešanai recipientos vai dziļai sasaldēšanai (līdzīgi kā sperma pajetēs), lai pielietotu vēlāk.

OPU/IVF gadījumā no govs tiek ņemti oocīti jeb olšūnas. Tad nenotiek iejaukšanās govs dabiskajā dzimumciklā, kā tas ir MOET gadījumā, un donorgovs dzemde netiek izmantota vispār. Nekaitējot govs (arī grūsnas) veselībai, oocītus no tās var iegūt reizi divās nedēļās. Grūsnām govīm oocītu aspirāciju var veikt līdz 4. grūsnības mēnesim, jo vēlāk olnīcas ir grūti aizsniedzamas, lai maksimāli veikli varētu paveikt procedūru. Ir izstrādāta metodika ikdienas pielietošanai, kad, nodrošinot atbilstošus nosacījumus, oocītus var iegūt no govs, kas kaut kādu iemeslu dēļ ir izbrāķēta un nonākusi kautuvē. No tikko nokautas govs veiksmīgi var iegūt dzīvotspējīgus oocītus embriju ieguvei laboratorijas apstākļos.

Projekta partneris AS Agrofirma Tērvete mūs laipni nodro­šina ar recipientiem.

Oocīti (vai olnīcas no kautuves) tiek transportēti uz laboratoriju pēc iespējas drīz pēc to iegūšanas, ievērojot temperatūras režīmu un nodrošinot oocītiem labvēlīgu vidi. Laboratorijā oocīti tiek atrasti aspirētajā šķidrumā, tie tiek pārnesti uz atmazgāšanas vidi, lai atbrīvotu no gļotām un epitēlija šūnām, ko saturēja sākotnējais šķidrums.

Tā kā iegūtie oocīti tika aspirēti no dažāda izmēra un attīstības stadijas folikuliem un tie ir nenobrieduši (nobriedis oocīts ir tikai dominējošajā folikulā, kas gatavs ovulācijai govs meklēšanās gadījumā), tiem ir jānodrošina apstākļi nobriešanai. Nenobriedināti oocīti nav spējīgi apaugļoties. Lai to paveiktu, īpašā šķīdumā ievietoti oocīti tiek izturēti CO₂ inkubatorā fizioloģiskā temperatūras un mitruma režīmā. Pēc zināma laika nobriedušos oocītus atkārtoti novērtē un tad tos var apaugļot ar vaislinieka spermu laboratorijas apstākļos. Apaugļošanai parasti izmanto dziļsaldēto spermu. Dziļsaldētā sperma ir ne tikai konvencionāli jāatkausē, bet arī īpaši jāsagatavo, veicot kapacitācijas procedūru divos etapos. Sperma tiek novērtēta gan uzreiz pēc atkausēšanas, gan arī pēc kapacitācijas procedūras. Tad oocītiem, kuri ir pārnesti šim procesam atbilstošā apaugļošanas vidē, pievieno sagatavoto spermu. Laboratorijas apstākļos ar vienu spermas devu var apaugļot 100 un, kā minēts literatūrā, pat 200 oocītu. Dzimumšūnas (oocīti un spermiji) uz zināmu laiku tiek ievietoti CO₂ inkubatorā apaugļošanās norisei.

1. attēls. Svaigi aspirēti, nomazgāti dažādas attīstības stadijas un kvalitātes vienas govs oocīti jeb olšūnas.

2. attēls. Nobriedināti oocīti ar ekspandētiem kumulus šūnu kompleksiem.

3. attēls. Denudēti oocīti pēc apaugļošanas jeb prezumptīvās zigotas pirms kultivēšanas.

4. attēls. Kultivēšanas process pēc 72 stun­dām. Divu līdz 16 šūnu stadija, neapaugļots oocīts (viens apakšā, otrs no kreisās otrajā rindā otrais).

5. attēls. Septītā diena (laboratorijā). Blastocistas (transferējami embriji) atzīmētas ar bultiņu.

6. attēls. Septītā dienā no govs iegūti embriji – blastocistas.

Nākamajā dienā potenciālās zigotas (tā sauc apaugļotas olšūnas) tiek atbrīvotas no starainā vainaga jeb kumulus šūnām un pārliktas atkal citā specifiskā vidē kultivēšanās procesam. Kultivēšanās process notiek īpašā gāzu sastāva inkubatorā septiņas dienas.

Šūnu dalīšanos var novērtēt 24–48–72 stundas no kultivēšanas sākuma. Pēc nedēļas var novērtēt galīgo rezultātu un jauniegūtos embrijus pārnest recipientā svaigus vai arī dziļi sasaldēt līdz laikam, kad ir pieejams piemērots recipients atbilstošajā dzimumcikla dienā. Embrijus pārnes recipientā 7. dzimumcikla dienā, jo tie ir septiņas dienas veci.

Pārnešanas procedūru drīkst veikt tikai atbilstošās tiesības saņēmis speciālists. Ja ir tikai MA sertifikāts, to darīt nedrīkst. ET laikā recipientam ir jāveic epidurālā anestēzija, jo 7. dzimumcikla dienā dzemdes kakls ir noslēgts, turklāt embrijs ir maksimāli saudzīgi jāievieto dziļi dzemdes ragā, kurā atbilstoši ir attīstījies labas kvalitātes un izmēra dzeltenais ķermenis. Atbilstošas iemaņas un pieredze ir izšķirošas.

Jāatzīmē, ka ET rezultāti nebūs gaidītie, ja saimniecībā nav labi MA rezultāti.

ET notikums ir jāreģistrē LDC datu bāzē, pretējā gadījumā jaundzimušā izcelsme nebūs identificējama. Pašlaik speciālistiem ar ET tiesībām LDC datu bāzē ir pieeja īpašai formai šī notikuma reģistrēšanai MO rezultātā iegūtiem embrijiem.